- · 《数理化学习(高中版 )》[06/29]
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电针干预放射性脑损伤小鼠海马区突触可塑性相(2)
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摘要：1.4.5 免疫组织化学染色 行为学测试结束后，每组取3只小鼠，2%戊巴比妥钠以0.01 mL/g腹腔注射麻醉后，打开胸腔并暴露心脏，0.1 mol/L PBS 及50 g/L多聚甲醛各
1.4.5 免疫组织化学染色 行为学测试结束后，每组取3只小鼠，2%戊巴比妥钠以0.01 mL/g腹腔注射麻醉后，打开胸腔并暴露心脏，0.1 mol/L PBS 及50 g/L多聚甲醛各30 mL冲洗全身毛细血管，然后断头取脑，取海马组织，用50 g/L多聚甲醛固定24 h后进行石蜡包埋、切片。经脱蜡、抗原修复、灭活过氧化物酶、血清封闭、添加一抗(BrdU单克隆抗体，1∶40)和山羊抗小鼠二抗、DAB染色、复染等过程后在400倍光镜下观察BrdU阳性表达。每只动物选取2个切片，每张切片随机选取2个视野，采用Image软件进行平均吸光度分析。
1.4.6 Western blot检测相关蛋白的表达 行为学测试结束后，每组取3只小鼠，2%戊巴比妥钠以0.01 mL/g腹腔注射麻醉后，打开胸腔并暴露心脏，用0.1 mol/L PBS 30 mL经左心室-主动脉灌注并固定。灌注结束后断头取脑，并快速分离出海马组织，该操作于冰上进行。提取组织蛋白后，经电泳转膜、一抗(Notch 1、Hes 1、突触素、突触后致密蛋白95和脑源性神经营养因子，1∶1 000)孵育、TBST冲洗、二抗(兔抗鼠多克隆抗体，1∶3 000)孵育后TBST冲洗并滴入增强发光试剂，在暗室曝光匣对胶片曝光，采用Image J软件系统分析条带的吸光度值，实验结果为目的蛋白条带的吸光度值/内参蛋白条带的吸光度值的比值。重复实验3次。
1.5 主要观察指标 ①水迷宫实验中逃避潜伏期、穿越平台次数和目的象限停留时间，T迷宫实验中错误次数；②Notch信号通路相关蛋白Notch1和Hes1的表达；③BrdU阳性细胞数量；④突触可塑性相关蛋白突触素、突触后致密蛋白95和脑源性神经营养因子的表达。
1.6 统计学分析 实验数据采用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析，实验结果以表示，采用单因素方差分析结合Tukey’s两两比较和重复测量方差分析进行检验。以P＜ 0.05为差异有显著性意义。
2 结果 Results
2.1 实验动物数量分析 实验选用雄性C57BL/6J小鼠30只，随机分为3组，造模后进行水迷宫与T迷宫实验，按照随机原则并在保证每组动物数量相同的条件下每组选取6只小鼠进行后续实验，共筛选18只动物。
2.2 T迷宫实验结果 电针干预前，与空白组比较，模型组与电针组小鼠错误次数均明显增加(P＜ 0.05)，模型组与电针组差异无显著性意义。电针干预后，与空白组比较，模型组小鼠错误次数明显增加(P＜ 0.05)；与模型组比较，电针组小鼠错误次数明显降低(P＜ 0.05)，差异有显著性意义，见表1。
表1 ｜电针干预前后各组小鼠T迷宫实验错误次数 (,n=6)Table 1 ｜Number of errors in the T maze of mice in each group before and after electroacupuncture intervention表注：与空白组比较，aP＜ 0.05；与模型组比较，bP＜ 0.05组别 电针干预前 电针干预后空白组 1. 1.模型组 2. 2.电针组 3. 1.
2.3 水迷宫实验结果 电针干预前，与空白组比较，模型组及电针组逃避潜伏期显著延长，目的象限停留时间及穿越平台次数均显著降低(P均 ＜ 0.01)，模型组与电针组差异无显著性意义。电针干预后，与模型组比较，电针组逃避潜伏期显著缩短，目的象限停留时间及穿越平台次数均显著增加(P均 ＜ 0.01)，见图 1。
2.4 各组小鼠海马CA1区BrdU阳性细胞数 BrdU 免疫组织化学阳性染色呈棕褐色，主要位于细胞核内。与空白组比较，模型组BrdU阳性细胞数显著降低(P＜ 0.01)；与模型组比较，电针组BrdU阳性细胞数显著增加(P＜ 0.01)，见图2。
2.5 各组小鼠海马区Hes1和Notch1蛋白表达 与空白组比较，模型组Notch1、Hes1蛋白表达显著降低(P＜ 0.01)；与模型组比较，电针组Notch1蛋白表达显著增加(P＜ 0.01)，Hes1蛋白表达量明显降低(P＜ 0.05)，见图3。
2.6 各组小鼠海马区突触素、突触后致密蛋白95和脑源性神经营养因子蛋白表达 与空白组比较，模型组小鼠海马区突触素、突触后致密蛋白95和脑源性神经营养因子蛋白表达均不同程度降低 (P＜ 0.05，P＜ 0.01，P＜ 0.01)；与模型组比较，电针组小鼠海马区突触素、突触后致密蛋白95和脑源性神经营养因子蛋白表达均不同程度增加(P＜ 0.05，P＜0.01，P＜ 0.01)，见图 4。
图1｜电针干预前后各组小鼠水迷宫实验结果Figure 1｜Results of water maze test of mice in each group before and after electroacupuncture intervention图注：A-C依次为电针干预前各组小鼠逃避潜伏期、目的象限停留时间以及穿越平台次数比较；D-F依次为电针干预后各组小鼠逃避潜伏期、目的象限停留时间以及穿越平台次数比较；G-I依次为电针干预后空白组、模型组和电针组水迷宫轨迹图。与空白组比较，aP＜ 0.01；与模型组比较，bP＜ 0.01
文章来源：《数理化学习》 网址: http://www.slhxxzz.cn/qikandaodu/2021/0501/657.html